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為此，廣州博濟(jì)醫(yī)藥微信公眾號(hào)特邀生物分析專家、博濟(jì)醫(yī)藥子公司深圳博瑞副總經(jīng)理袁智博士，開(kāi)設(shè)“袁來(lái)如此”專欄，就大分子生物分析、藥代動(dòng)力學(xué)等相關(guān)話題展開(kāi)專題研究，希望通過(guò)相關(guān)知識(shí)與經(jīng)驗(yàn)的分享，引發(fā)更多讀者的討論交流，加速振興中國(guó)的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展，敬請(qǐng)垂注！
本文為“袁來(lái)如此”專欄的第一篇，旨在根據(jù)已發(fā)表的文獻(xiàn)資料，對(duì)與大分子生物分析相關(guān)的知識(shí)進(jìn)行系統(tǒng)地介紹。
配體結(jié)合式測(cè)試方法（LBA，也稱為immunoassays）是一種常用的分析工具，用于根據(jù)與其他生物分子的相互結(jié)合作用（binding interaction），定量測(cè)定生物分子（目標(biāo)分析物，Analyte）在生物體液中的濃度。LBA要求至少使用一個(gè)生物分子來(lái)定量目標(biāo)分析物，這個(gè)生物分子通常被稱為關(guān)鍵試劑，須能夠特異性地結(jié)合目標(biāo)分析物。
LBA可分為兩大類：（1）液相結(jié)合測(cè)試，其目標(biāo)分析物與標(biāo)記過(guò)的檢測(cè)試劑之間的結(jié)合反應(yīng)發(fā)生在溶液相（圖1A）；（2）固相結(jié)合測(cè)試，其中一個(gè)關(guān)鍵試劑被固定到固體表面，如微孔板或樹(shù)脂（圖1B），以捕獲樣本中的目標(biāo)分析物。液相測(cè)試通常需要分離步驟，如色譜或電泳或離心，從而將目標(biāo)分析物-標(biāo)記檢測(cè)試劑從未結(jié)合的分子中分離出來(lái)進(jìn)行定量。
在應(yīng)用上，LBA是重要的評(píng)估生物藥PK/TK時(shí)的主要定量分析方法之一，該方法的特異性和選擇性取決于目標(biāo)分析物與其他生物分子（如受體、針對(duì)候選生物藥的抗體和核酸適配體（aptamer））的相互作用。
該方法中可觀察到儀器響應(yīng)與生物藥的濃度間接相關(guān)，簡(jiǎn)言之，檢測(cè)信號(hào)的來(lái)源是酶化學(xué)反應(yīng)或放射化學(xué)反應(yīng)，而這些反應(yīng)則是各種相互結(jié)合作用（binding interactions）的一部分。
一般而言，大分子的物理化學(xué)特性無(wú)法直接產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)，不能用于這樣的定量分析方法。主要原因在于這些binding interactions的內(nèi)在性質(zhì)，LBA的標(biāo)（校）準(zhǔn)曲線的動(dòng)態(tài)（定量）范圍比較狹窄，同時(shí)也是非線性，S型的（sigmoidal curve）。
如圖1所示，在液相測(cè)試中，結(jié)合反應(yīng)在溶液中發(fā)生，其中一個(gè)目標(biāo)分析物與標(biāo)記過(guò)的檢測(cè)試劑結(jié)合，然后再通過(guò)后續(xù)的分離操作將目標(biāo)分析物-標(biāo)記檢測(cè)試劑從未結(jié)合的分子中分離出來(lái)。
在固相測(cè)試中，一個(gè)關(guān)鍵試劑被固定到固體表面，如微孔板或樹(shù)脂，此試劑在固體表面結(jié)合目標(biāo)分析物，從而致使未結(jié)合的分子被分離出來(lái)。
Yalow和 Benson于1960年開(kāi)發(fā)的測(cè)定人類胰島素的方法，是放射免疫測(cè)定（RIA）的標(biāo)志性例子，Yalow因此于1977年獲得諾貝爾獎(jiǎng)。簡(jiǎn)單地說(shuō)，就是通過(guò)用魚精蛋白鋅牛胰島素或商業(yè)常規(guī)牛胰島素免疫豚鼠，以獲得作為該RIA方法關(guān)鍵試劑的胰島素結(jié)合抗體。
在這種方法中，由于缺乏人類胰島素的結(jié)晶體，因此I131標(biāo)記的結(jié)晶牛胰島素（胰島素-I131）被用作示蹤劑。此 RIA 的原理是基于樣本中的人胰島素與豚鼠血清中的胰島素結(jié)合抗體的強(qiáng)力結(jié)合（圖2中的步驟1），并讓已知濃度的胰島素-I131與該抗體的結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)（圖2步驟2-3）。胰島素-I131與胰島素結(jié)合抗體的結(jié)合在溶液中進(jìn)行，游離的胰島素-I131與結(jié)合了抗體的胰島素-I131的分離通過(guò)紙色譜電泳技術(shù)實(shí)現(xiàn)，這就使得定量測(cè)定胰島素-I131成為可能，其代表了樣本中胰島素的濃度。在此方法中，最低可定量的胰島素濃度為1.4μU。
在這個(gè)有里程碑意義的研究發(fā)表之后，RIA在20世紀(jì)后期得到了廣泛的應(yīng)用。在使用適當(dāng)?shù)年P(guān)鍵試劑時(shí)，RIA靈敏度和選擇性都極高，而其主要挑戰(zhàn)包括使用和處置放射性材料的許可證要求、放射性同位素的標(biāo)記效率、成本及其有限的半衰期。在RIA得到應(yīng)用的十年內(nèi)，即20世紀(jì)的70年代初，就出現(xiàn)了非同位素免疫測(cè)定，如酶免疫測(cè)定（enzyme immunoassays，EIA），EIA通常被稱為ELISA，即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay）。
Engvall和Perlmann在1971年首次描述了一個(gè)定量兔免疫球蛋白G（兔IgG）的ELISA方法。其實(shí)質(zhì)就是從羊血清中提取的抗兔IgG用于結(jié)合兔子IgG，進(jìn)而結(jié)合了一種堿性磷酸酶（ALP）的兔IgG被用來(lái)與兔IgG相互競(jìng)爭(zhēng)和抗兔IgG血清的結(jié)合，以此建立濃度與儀器響應(yīng)（信號(hào)）之間的關(guān)系，生成的儀器信號(hào)與樣本中的IgG量成反比。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，學(xué)界運(yùn)用了不同的酶，如辣根過(guò)氧化物酶（HRP）、β-半乳糖苷酶（GAL）和熒光素酶（luciferase），使得EIA具有與RIA相當(dāng)?shù)撵`敏度。
圖 2. Yalow最初發(fā)明的胰島素放射免疫測(cè)定的原理圖。樣本中的胰島素在溶液中與抗胰島素血清結(jié)合（步驟1），然后把已知濃度的I131標(biāo)記的牛胰島素添加到反應(yīng)溶液中（步驟2），樣本中的胰島素與I131標(biāo)記的牛胰島素（步驟3）相互競(jìng)爭(zhēng)與抗體的結(jié)合。使用人胰島素制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線以及胰島素抗體結(jié)合的I131標(biāo)記牛胰島素的濃度可以計(jì)算樣本中被置換的胰島素的濃度。
競(jìng)爭(zhēng)式ELISA格式是基于初始的胰島素RIA和IgG EIA方法中的結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)。來(lái)自樣品的目標(biāo)分析物（analyte）和參照分析物（reference analyte）與分析物特異性的抗體結(jié)合之間的競(jìng)爭(zhēng)是這種格式的關(guān)鍵。
抗體或目標(biāo)分析物都可以標(biāo)記酶，并用于結(jié)合反應(yīng)。使用標(biāo)記抗體（圖3Ai）時(shí)，參照分析物首先被動(dòng)地吸附到微孔板的孔中，然后加入含有目標(biāo)分析物的樣本，如細(xì)胞裂解液、血清等，并與固定濃度的標(biāo)記抗體一起孵育。樣本中的目標(biāo)分析物與固定的分析物競(jìng)爭(zhēng)，以結(jié)合有限數(shù)量的標(biāo)記抗體，隨后的酶反應(yīng)產(chǎn)生的信號(hào)與樣本中目標(biāo)分析物的濃度成反比?；蛘?，可以使用固相吸附的抗體和標(biāo)記分析物（圖3Aii），樣本中的目標(biāo)分析物與固定數(shù)量的標(biāo)記分析物共同孵育，并與之相互競(jìng)爭(zhēng)和固定抗體的結(jié)合。與前面的示例中一樣，生成的信號(hào)與樣本中目標(biāo)分析物的濃度成反比。
直接式ELISA是最簡(jiǎn)單的ELISA格式，樣品中的目標(biāo)分析物吸附到微孔板的孔中，通過(guò)酶偶聯(lián)試劑或標(biāo)記檢測(cè)抗體，直接實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分析物的檢測(cè)，如圖3B所示。
圖3. 競(jìng)爭(zhēng)式（Ai & Aii）、直接（B）和間接（C）ELISA測(cè)試格式的原理圖。目標(biāo)分析物（Analyte）代表被測(cè)定的目標(biāo)蛋白質(zhì)。在競(jìng)爭(zhēng)式ELISA中，可以標(biāo)記目標(biāo)分析物或抗體，而在直接或間接ELISA格式中，只標(biāo)記檢測(cè)抗體。
間接ELISA類似于直接ELISA，兩者間主要差別在于主要（primary）抗體未被標(biāo)記。目標(biāo)分析物的檢測(cè)是通過(guò)再次添加一個(gè)酶偶聯(lián)試劑或標(biāo)記檢測(cè)抗體，使其與主要抗體結(jié)合而實(shí)現(xiàn)的，如圖3C 所示。
直接ELISA更快速，因?yàn)樗乳g接ELISA少一個(gè)步驟。它通常用于需要快速完成的常規(guī)測(cè)試，商業(yè)化的家用懷孕測(cè)試就是這種格式的一個(gè)例子。而間接ELISA雖然較直接ELISA多一個(gè)步驟，但信號(hào)放大通常優(yōu)于直接ELISA。因此，間接ELISA通常比直接ELISA更敏感，可以測(cè)量更低豐度的蛋白質(zhì)。
正如圖3C 所示，間接ELISA較直接ELISA增加的步驟正是來(lái)自于樣本的目標(biāo)分析物直接吸附到微孔板，但想要達(dá)到這樣的效果，亦有一定的難度。因?yàn)樵谙窗宀襟E中，可能會(huì)洗掉目標(biāo)分析物，因此可能會(huì)增加測(cè)試的變異性。此外，非特異性地結(jié)合到微孔板的其它蛋白可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。為了克服上述挑戰(zhàn)，其它可靠性更高的格式進(jìn)而衍生出來(lái)，其中有通常被稱為夾心、橋聯(lián)或競(jìng)爭(zhēng)性ELISA（在夾心或橋聯(lián)ELISA格式中），在這些格式中，一種能與目標(biāo)分析物特異性結(jié)合的生物試劑首先被吸附到微孔板中。
圖4. 夾心式ELISA（A）和橋接式（B）ELISA的原理圖
夾心式ELISA需要兩個(gè)不同的試劑或抗體，一個(gè)用于捕獲，另一個(gè)用于檢測(cè)目標(biāo)分析物。這些試劑與目標(biāo)分析物的不同表位（epitopes，結(jié)合位點(diǎn)）結(jié)合，從而形成夾心式格式（圖4A），由此產(chǎn)生的相互作用具有特別高的特異性（因?yàn)椴东@和檢測(cè)步驟都需要特異的表位識(shí)別，才能生成檢測(cè)信號(hào)）。
橋聯(lián)ELISA常用于測(cè)定具有兩個(gè)相同抗原結(jié)合位點(diǎn)(2價(jià))的抗體或其它目標(biāo)分析物的濃度，可以標(biāo)記與捕獲相同的試劑，用于檢測(cè)一個(gè)二價(jià)的目標(biāo)分析物，因此，目標(biāo)分析物可被視為捕獲和檢測(cè)試劑之間的橋梁（圖 4B）。夾心或橋接ELISA 格式均可設(shè)計(jì)成為競(jìng)爭(zhēng)式的ELISA。
上述格式是ELISA的基本設(shè)計(jì)，所有格式都可以使用競(jìng)爭(zhēng)或抑制條件加以調(diào)整，來(lái)測(cè)定抗原或抗體（圖5），所有方法都要求與試劑預(yù)先反應(yīng)/孵育才能達(dá)到最佳狀態(tài)。這些最佳狀態(tài)可以通過(guò)添加抗原（圖5a）或抗體（圖5b）來(lái)給予挑戰(zhàn)。隨著溶液中游離的抗原（抗體）的增加，能夠與固定底物（immobilized substrate）結(jié)合的抗體（抗原）的數(shù)量則減少。洗滌步驟后，添加生色劑底物（chromophore substrate）以產(chǎn)生信號(hào)（顏色變化或發(fā)光）。抗體/抗原挑戰(zhàn)引起的信號(hào)變化揭示了有關(guān)競(jìng)爭(zhēng)性抗原/抗體的信息。競(jìng)爭(zhēng)式ELISA對(duì)于測(cè)定復(fù)雜混合物中的抗原濃度相當(dāng)有用，特別是在可能含有抗原的未知樣品與含有已知數(shù)量的純化抗原的類似樣品時(shí)。
免疫表位（epitope）是宿主免疫系統(tǒng)一般能夠識(shí)別的抗原分子的一部分。當(dāng)抗原的表位以非共價(jià)鍵的形式與其所誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體的確定互補(bǔ)性的區(qū)域（complementarity determining region）相互作用時(shí)，就會(huì)發(fā)生特異性的識(shí)別。
抗體親和力（affinity）表示抗體與其單一目標(biāo)分析物（analyte）/抗原（antigen）結(jié)合的烈度（intensity）或強(qiáng)度（strength），由解離常數(shù)（Kd）代表。低親和力抗體與抗原結(jié)合弱，容易解離；而高親和力抗體與抗原結(jié)合非常強(qiáng)，在多次的洗滌步驟中不易解離。從ELISA的角度來(lái)看，后者是首選，通常用于捕獲目標(biāo)分析物。
親和度（Avidity）是衡量一個(gè)抗體與多個(gè)抗原決定因子（antigenic determinants）結(jié)合的整體強(qiáng)度的指標(biāo)。抗體對(duì)某一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的親和力并不總是能反映抗體-抗原相互作用的強(qiáng)度，例如免疫球蛋白G（IgG）有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)（2價(jià)），而IgM有10個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)（10價(jià)），親和度表示IgG或IgM的，分別對(duì)于2個(gè)或10個(gè)抗原分子的整體結(jié)合強(qiáng)度（overall strength）。
關(guān)鍵試劑
一個(gè)ELISA方法最重要的組成部分是測(cè)試試劑，它決定了ELISA方法的靈敏度、特異性和方法的質(zhì)量。ELISAs常用于藥物開(kāi)發(fā)：在PK評(píng)估中，定量測(cè)定蛋白生物藥的濃度；測(cè)定內(nèi)源性蛋白和生物標(biāo)志物；檢測(cè)抗藥物抗體的存在以進(jìn)行免疫原性評(píng)估等。LBA方法首選的關(guān)鍵試劑是單克隆抗體（MAbs）或多克隆抗體（PAbs），而不是重組靶標(biāo)蛋白。為了產(chǎn)生PAbs或MAbs，需要將生物藥或生物標(biāo)志物蛋白及其佐劑或載體，根據(jù)相關(guān)應(yīng)用給到合適的宿主動(dòng)物物種上進(jìn)行免疫。對(duì)于PAbs，兔子、山羊和綿羊是最常用的宿主物種，因?yàn)樗鼈兊捏w型大（產(chǎn)生的抗體量也大），容易找到血管和強(qiáng)健的免疫反應(yīng)。
用于免疫的每一個(gè)抗原都是高度復(fù)雜的，因?yàn)樗梢猿尸F(xiàn)大量的，可以被不同的淋巴細(xì)胞識(shí)別的表位,這些淋巴細(xì)胞隨后被激活。激活了的淋巴細(xì)胞增殖，分化成漿細(xì)胞，并分泌出多克隆抗體的混合體。PAb庫(kù)（混合體）代表了不同抗體的集合群體，這些抗體可以識(shí)別抗原的多個(gè)表位(用于ELISA分析)。為了生產(chǎn)MAbs，需要進(jìn)一步分離單個(gè)淋巴細(xì)胞，并與骨髓瘤細(xì)胞融合，以產(chǎn)生不死的雜交瘤細(xì)胞，從而持續(xù)產(chǎn)生特定的MAb。因此，同一個(gè)克?。╟lone）的抗體只識(shí)別一個(gè)抗原的單個(gè)表位。在ELISA中會(huì)頻繁使用MAbs或PAbs，其選擇（對(duì)于每種ELISA格式而言）取決于許多考慮因素：如可及性（Availability）、親和力、特異性（Specificity）和交叉反應(yīng)性（Cross-reactivity）。
抗體的特異性（specificity）是特異性地結(jié)合相關(guān)抗原的能力，與ELISA方法的選擇性（selectivity）不盡相同，但相關(guān)。選擇性是一個(gè)定量分析方法，在其它潛在干擾成分存在的情況下，從眾多其它無(wú)關(guān)的蛋白質(zhì)中鑒別和定量測(cè)定目標(biāo)分析物濃度的能力。交叉反應(yīng)性（cross-reactivity）是指抗體與除目標(biāo)抗原之外的其它多個(gè)抗原結(jié)合的能力。當(dāng)抗原（目標(biāo)分析物）的與抗體試劑結(jié)合的表位與其它蛋白質(zhì)相似時(shí)就會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)。一般來(lái)說(shuō)，特異性和交叉反應(yīng)性對(duì)ELISA方法的選擇性和基質(zhì)效應(yīng)有很大影響。如果使用高親和力抗體作為捕獲試劑，抗體/目標(biāo)分析物的復(fù)合物就能夠在含有多種蛋白質(zhì)的“混合物”樣品中有效地形成，基質(zhì)效應(yīng)會(huì)隨之降低，而方法的選擇性最終會(huì)得到提升。
表1總結(jié)了ELISA可能用到的試劑和各種通用或首選格式。
測(cè)試試劑的可及性可能因藥物開(kāi)發(fā)的不同階段而異。在早期探索階段，可能無(wú)法得到MAbs或PAbs，故常常選擇重組生產(chǎn)的配體（即生物藥的靶點(diǎn)）作為關(guān)鍵試劑來(lái)測(cè)定游離的蛋白生物藥(therapeutic protein，TP)的濃度。在早期臨床前研究中，針對(duì)IgG Fc部分的通用抗體可用于單克隆抗體藥物，盡管僅能測(cè)定總濃度（結(jié)合靶標(biāo)后的TP +游離的TPf）。
生物標(biāo)志物的定量分析方法
各種體外診斷試劑盒在商業(yè)上可用于藥物的早期發(fā)現(xiàn)階段，也可從不同的供應(yīng)商獲得各種重組蛋白和抗生物標(biāo)記物蛋白的抗體。雖然生物標(biāo)記物的定量分析方法與PK方法相似，但這二者之間存在明顯差別。與PK方法類似，生物標(biāo)志物的定量分析方法可用于測(cè)定目標(biāo)基質(zhì)中生物標(biāo)志物蛋白的游離濃度或總濃度。夾心式測(cè)試格式是主要選擇，通常用于測(cè)定生物標(biāo)志物蛋白的游離或總濃度。雖然當(dāng)一個(gè)生物藥具有抑制作用時(shí)，需要測(cè)量游離的生物標(biāo)志物蛋白濃度，但開(kāi)發(fā)測(cè)定游離的生物標(biāo)志物蛋白的方法有相當(dāng)?shù)奶魬?zhàn)性，可能需要額外的分離步驟。
人源化的或全人源的單克隆抗體或重組蛋白，作為藥物給予受試者/動(dòng)物后，可誘導(dǎo)形成針對(duì)該生物藥的抗體，特別是在臨床前的動(dòng)物試驗(yàn)中，這些由生物藥誘導(dǎo)而形成的抗體通常被稱為抗藥物抗體（ADA）。免疫檢測(cè)方法是檢測(cè)ADA是否存在于血清中的第一級(jí)檢測(cè)。不同的ADA反應(yīng)，如表位特異性（idiotype vs. nonidiotype，特異與非特異性）和數(shù)量（滴度或相對(duì)濃度），會(huì)影響對(duì)ADA和生物藥的準(zhǔn)確定量。由于ADAs會(huì)在血液循環(huán)中與生物藥形成免疫復(fù)合物，高濃度的蛋白生物藥能夠干擾ADA的檢測(cè)。
備注：idiotype：免疫球蛋白（如IgG）可變區(qū)域的分子結(jié)構(gòu)和構(gòu)象，賦予其抗原特異性。
LBA測(cè)試方法在各種生物分子的定量分析方面擁有各種優(yōu)勢(shì)。它們?cè)诖蠖鄶?shù)平臺(tái)（如比色計(jì)或平面電化學(xué)發(fā)光）上，成本通常很低。當(dāng)高親和力MAbs用于LBAs時(shí)，LBA方法在檢測(cè)和定量分析存在于異質(zhì)性的基質(zhì)環(huán)境中的目標(biāo)分析物方面，具有高度靈敏度和特異性。出于研究目的，該類方法的靈敏度可以低至每毫升毫微微克的級(jí)別（femtogram/mL）。大多數(shù)LBAs的操作程序不涉及樣品分離的步驟，而基于LC-MS/MS的定量分析方法則需要。當(dāng)然，LBA也有幾個(gè)缺點(diǎn)，與LC-MS/MS方法相比，LBA方法的動(dòng)態(tài)范圍較狹窄。雖然用于基礎(chǔ)研究的方法可以達(dá)到4-6個(gè)指數(shù)級(jí)的動(dòng)態(tài)范圍，但用于規(guī)范性研究（regulated study）的驗(yàn)證過(guò)的方法，其定量范圍往往僅為2-3個(gè)指數(shù)級(jí)，這是因?yàn)楸仨毐３址椒ǖ姆€(wěn)健性和更好的重現(xiàn)性。
最重要的區(qū)別是，LBA的性能取決于所使用試劑的質(zhì)量和特異性。因此，試劑生成/選擇（MAbs或PAbs）是方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中的關(guān)鍵步驟，這可能非常耗時(shí)，3到9個(gè)月不等。當(dāng)使用分析物特異性的試劑來(lái)捕獲目標(biāo)分析物時(shí)，這個(gè)缺點(diǎn)對(duì)LC-MS/MS方法也是存在的。從生物標(biāo)志物方法的角度來(lái)看，試劑的交叉反應(yīng)可導(dǎo)致該方法的非特異性。因此，強(qiáng)烈建議進(jìn)行額外的測(cè)試以闡明試劑的交叉反應(yīng)性和非特異性。
本文概述了LBA測(cè)試方法，包括其主要概念的起源和演變，并且回顧了常用的大分子生物分析方法的測(cè)試格式。最初的LBA測(cè)試方法誕生于1960年，是為測(cè)定胰島素而開(kāi)發(fā)的放射免疫測(cè)試（radioimmunoassay），LBA測(cè)試方法的基礎(chǔ)是至少有一種蛋白質(zhì)與感興趣的目標(biāo)分析物有相互作用。在當(dāng)今的實(shí)驗(yàn)室, 酶免疫測(cè)試（enzyme immunoassay）已在很大程度上取代了放射性免疫測(cè)試，成為了LBA測(cè)試方法的首選形式。
此外，本文還介紹了其它各種測(cè)試格式，如競(jìng)爭(zhēng)式（competitive）、夾心式（sandwich）和橋接式（bridging），以及其所需的關(guān)鍵試劑。最后，簡(jiǎn)明扼要地討論了LBA測(cè)試方法在蛋白質(zhì)生物藥開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用，以及與其它生物分析平臺(tái)的比較。
自上世紀(jì)60年代對(duì)胰島素進(jìn)行定量測(cè)定以來(lái)，基于與其它生物分子結(jié)合作用的LBA方法已被廣泛地用于生物分子的定量分析。例如，在蛋白質(zhì)生物藥開(kāi)發(fā)過(guò)程中，這些方法為定量分析或檢測(cè)蛋白質(zhì)提供了一種準(zhǔn)確和經(jīng)濟(jì)有效的方法。測(cè)試試劑（MAbs或PAbs）生成/選擇是LBA方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中的關(guān)鍵步驟，一旦選擇好了試劑，不同測(cè)試平臺(tái)上的LBA方法能夠提供顯著節(jié)約時(shí)間和經(jīng)濟(jì)成本。
如前所述，另一個(gè)主要的大分子生物分析平臺(tái)是液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS/MS）。在小分子藥物的生物分析中，LC-MS/MS方法是毋庸置疑的王者，在大分子分析中，LC-MS/MS的重要性也在不斷地增加，特別是在與LBA方法以某種形式組合之后?？梢钥隙ǎ锓治鰳I(yè)界將繼續(xù)探索LC-MS/MS在蛋白質(zhì)藥物的生物分析中的應(yīng)用。生物分析行業(yè)必須證明LC-MS/MS在藥物開(kāi)發(fā)的整個(gè)過(guò)程中，與LBA方法相比較，具有重現(xiàn)性（reproducibility）、可轉(zhuǎn)移性（transferability）、可靠性（reliability）和成本效益（cost–effectiveness）等方面的顯著優(yōu)勢(shì)。本系列后續(xù)將介紹相關(guān)知識(shí)，敬請(qǐng)關(guān)注。
本文來(lái)源：生物制藥小編
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